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你的细胞呼吸顺畅吗?

2020-07-24 11:12:07 来源:互联网 阅读:-

为了生存,细胞需要 ATP 形式来提供能量维持正常生理活性。这种形式的能量是通过糖酵解和线粒体呼吸过程产生的。当两者都产生 ATP 时,糖酵解在缺乏氧气的情况下可以发挥作用,而线粒体在氧化磷酸化 (OXPHOS) 的最后一步需要氧气参与产生 ATP。

这些途径在适应环境压力、底物可用性和缺氧的同时,动态地转变以满足细胞的能量需求。

一般而言,测量其动态的变化提供了比单点测量 ( 例如 ATP 终点法 ) 更多的关于代谢反应的信息。呼吸作用受到抑制是药物毒性后线粒体功能紊乱的重要、敏感指标。线粒体功能的异常与越来越多的疾病有关,从神经退行性病变到癌症。





了解这些途径是如何应对效应化合物作出何种反应,可以为了解细胞的整体功能和决定细胞命运的潜在机制提供有用的见解。

新型检测试剂盒的出现和更多功能微孔板读板机的问世,为实现基于微孔板形式的代谢分析提供了有效的手段。

这里,我们描述了在 SpectraMax i3x 微孔读板机上使用 Agilent MitoXpress Xtra 耗氧量分析和 Agilent pH-Xtra™ 糖酵解分析。



采用基于细胞检测的葡萄糖氧化酶 (GOx) 法,使用标准 96 孔板评价细胞氧耗和糖酵解。

MitoXpress Xtra 耗氧量分析可以直接实时测量细胞耗氧量。该试剂是一种氧敏感的水溶性、穿膜形荧光探针。通过 O2 淬灭荧光信号,使得信号与孔中 O2 的浓度成反比。随着氧气的消耗,荧光逐渐增加,因此利用动力学测量,用户可以通过监测信号增加的速度来推断线粒体的活性。

The pH-Xtra 糖酵解检测试剂可实时的、动态的检测细胞外的酸化率。糖酵解途径的葡萄糖它可以产生丙酮酸盐,用于在Krebs 循环中进一步氧化或产生乳酸盐 ( 乳酸 ),这使得细胞酸化胞外环境。pH 值的变化可使用 pH-Xtra 进行检测,为解糖酵解活性的研究提供了依据。



如同 MitoXpressXtra 一样,pH-Xtra 在生物范围内表现出灵敏的信号反应,可灵活、高通量地评估细胞外酸化率,并且在反应过程中不被消耗。根据荧光信号随时间的变化计算细胞外酸化率。

使用 MitoXpress Xtra 或 pH-Xtra 试剂的为了获得更高的检测灵敏度,建议在微孔板读板机上使用时间分辨荧光检测功能。SpectraMax i3x酶标仪标配光吸收、荧光和发光检测模式。MitoXpressXtra 和 pH-Xtra 试剂所需的时间分辨荧光检测可通过添加时间分辨(TRF)检测试剂盒实现。

TRF 检测卡盒内置专用光源和发射光滤光片,能够实现更高灵敏度的性能。获取和分析氧气消耗和糖酵解活力过程都可 通 过 使 用 Sofmaxpro.org 官 网 为 SoftMax Pro 软件 7.0.3 或更高版本提供的预设模板实现。


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